CRISPR-Cas9是现在操纵最轻便、耗时最短的基因编纂手艺,已普遍应用于多种物种的基因编纂[1]。CRISPR-Cas9的运用情势一般是构建一个含有特定物种内源性启动子并衔接Cas9基因和sgRNA的质粒,并将其转入细胞或体内表达。但是,质粒的构建和考证历程烦琐,消耗大量的实行工夫;而且质粒转入细胞或体内后,其降解需求一段时间,那可能会对后续实行发生影响。

为进步CRISPR-Cas9实行效力,保障实行结果,泓迅科技推出即用型sgRNA分解服务,我们能够完成sgRNA靶位点的设想、sgRNA DNA模板的分解、sgRNA体外转录和sgRNA的纯化,为客户供应可转入植物细胞并间接发挥作用的sgRNA。泓迅科技即用型sgRNA为您省去了质粒构建历程,消弭滞留质粒对后续实行的潜伏影响,勤俭实行工夫。现在,体外转录的sgRNA已胜利的对斑马鱼[2]、小鼠[3]和丝状真菌[4]等物种中的基因停止了正确的编纂。

另外,我们公司设想3条人和大鼠通用的negative control sgRNA (Syno® negative control sgRNA1,Syno® negative control sgRNA2,Syno® negative control sgRNA3),那3条negative control sgRNA不克不及靶向人和大鼠的基因序列,能够用作CRISPR/Cas9基因编纂的阴性对比实行。

即用型CRISPR-Cas9 sgRNA分解服务上风:

  1. 一站式服务:能够供应从sgRNA靶位点设想到下纯度即用型sgRNA获得的全部历程
  2. 周期短:最快3个工作日托付产量可达20ug
  3. 方便快捷:即用型sgRNA可间接打针或转染细胞停止基因编纂实行

即用型CRISPR-Cas9 sgRNA分解泓迅案例:

泓迅科技CRISPR-Cas9 sgRNA设想中央针对小鼠的多个基因各设想了8个sgRNA,然后停止体外sgRNA转录实行,实行周期短至2天,sgRNA制备量为10-20ug,能够极快天知足相干细胞学实行的一样平常需求。

实行流程:

一步法分解gRNA DNA模板

一步法分解gRNA DNA模板

grna-dna

实行效果:

  1. 将gRNA DNA模板平连至pUC57载体测序,比对效果取设想序列同等。如图1所示。
  2. 图1.仄连效果取设想序列比对图

    图1.仄连效果取设想序列比对图

  3. 将经由过程体外转录获得的sgRNA正在2%的琼脂糖中停止电泳,能够看到清楚条带。如图2所示。
  4. 图2. sgRNA琼脂糖凝胶电泳图

    图2. sgRNA琼脂糖凝胶电泳图

  5. 我们对个中一条sgRNA序列停止考证,起首将sgRNA逆转录得到cDNA,设想sgRNA扩增引物,经由PCR回响反映得到sgRNA的DNA序列;其次将DNA序列平连至pUC57载体停止测序,效果显现sgRNA序列准确。如图3所示。
  6. 图3. sgRNA序列考证琼脂糖凝胶电泳图

    图3. sgRNA序列考证琼脂糖凝胶电泳图

    注:1PCR效果的模板是sgRNA 逆转录cDNA;2PCR效果的模板是经DNaseI处置惩罚的sgRNA;3PCR效果的模板是体外转录的DNA模板

即用型CRISPR-Cas9 sgRNA分解服务周期及价钱:

服务称号 产物/服务内容 托付周期 托付项目 价钱
即用型sgRNA分解
  1. sgRNA设想
  2. DNA模板分解
  3. 体外转录sgRNA及纯化
  1. <10条,5个工作日
  2. 2.10-20条,10个工作日
  3. >20条,征询
sgRNA COA文件 询价
Syno® negative control sgRNA
  1. negative control sgRNA
  2. 体外转录sgRNA及纯化
3条,5个工作日 3条Syno® negative control sgRNA 询价

即用型CRISPR-Cas9 sgRNA分解订购取征询:
您能够经由过程以下恣意体式格局下单或征询,工作时间我们包管正在1小时内给您反应:

  1. Email:请将您的需求发送到support@synbio-tech.com
  2. 电话征询:您能够间接拨打免费热线4000-973-630转8034066h.com经验丰富的工程师
  3. QQ征询:任何手艺题目都可取我们在线互动,泓迅科技官方企业QQ:4000-973-630

参考文献:

[1]Jinek M, Chylinski K, Fonfara I, Hauer M, Doudna JA, Charpentier E. A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity [J]. Science. 2012,337(6096):816-821.
[2]Xiao A, Wang Z, Hu Y, et al. Chromosomal deletions and inversions mediated by TALENs and CRISPR/Cas in zebrafish [J]. Nucleic Acids Res. 2013,41(14):e141.
[3]Fujii W, Kawasaki K, Sugiura K, Naito K. Efficient generation of large-scale genome-modified mice using gRNA and CAS9 endonuclease [J]. Nucleic Acids Res. 2013,41(20):e187.
[4]Liu R, Chen L, Jiang Y, Zhou Z, Zou G. Efficient genome editing in filamentous fungus Trichoderma reesei using the CRISPR/Cas9 system. Cell Discovery. 2015.7.