基因编纂手艺的飞速生长, 特别是近年来CRISPR手艺的普遍运用,使得人类具有了史无前例的改动和润饰基因组的才能。CRISPR手艺来源于细菌自己匹敌噬菌体的“免疫系统”,这项手艺应用单链指导RNA(sgRNA)和Cas9卵白,能够正在体内和体外简朴、敏捷、低成本实现基因编纂。应用CRISPR手艺不只能够对编码基因停止有用编纂和基因组的大规模挑选,并且借能够联合NGS对非编码RNA(ncRNA)停止功用研讨。

CRISPR手艺曾经普遍应用于环球各个实验室,险些能够对所有细胞系和大多数常用实行植物的遗传物质停止革新。CRISPR手艺正在人类遗传性疾病、病毒感染疾病和癌症的相干研讨中具有辽阔远景和伟大发展潜力。

哺乳动物细胞基因/基因组编纂操纵流程

哺乳动物基因编纂流程

哺乳动物细胞基因/基因组编纂研讨思绪

1.哺乳动物细胞基因敲除(knock-out) /敲入(knock-in)

研讨思绪
  1. 基因组定制化的
    sgRNA设想
  2. 基因组大概Panel
    范围内的基因调取
    取sgRNA设想
  1. Syno® 2.0基因合
    取载体构建平台
  2.  Syno®3.0sgRNA
    文库构建平台
  3.  多形式物种的载体
    序列设想
  1. 体外sgRNA活性考证
  2. 体内sgRNA活性考证
  1. 稳固细胞株构建
  2. 基因敲除植物模子构建

2.哺乳动物细胞非编码RNA功用研讨

哺乳动物细胞非编码RNA功用研讨
  1. 基因组大概Panel
    范围内的基因调取
    取pg-sgRNA设想
  1. Syno®2.0基因分解载体
    构建
    平台
  2. Syno® 3.0 sgRNA文库构建
  3. 多形式物种的载体序列设想
  1. 缓病毒文库包装
  2. NGS考证文库质量
  1. 挑选前后NGS数据对照
  2. 细胞株构建或植物模子竖立

哺乳动物基因编纂服务上风

right一站式服务
泓迅科技供应从sgRNA设想、分解及活性检测,到稳固细胞株或植物模子构建和挑选的整体解决方案

right专利的手艺平台
具有专利的sgRNA设想软件,可以或许高效正确供应多物种序列设计方案

rightsgRNA文库分解
具有专利的Syno® 3.0芯片分解平台,文库构建覆盖率95%以上

right下通量功用挑选平台
可供应齐基因组文库下通量挑选,可平行剖析大量细胞的基因功用,审定相干的候选基因

哺乳动物细胞基因/基因组编纂运用案例

【泓迅案例】 构建人类sgRNA文库

【运用案例1】哺乳动物细胞CRISPR-Cas9的基因编纂

【运用案例2】 CRISPR-Cas9体系用于lncRNA基因的下通量功用挑选

参考文献
Ran, F.A., et al., Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system. Nature Protocols, 2013. 8(11): p. 2281-2308