CRISPR-Cas9手艺敲除酵母菌ADE1基因

【配景】

应用CRISPR-Cas9手艺编纂酵母菌中的一个920bp的ADE1基因。ADE1是腺嘌呤分解相干基因,若是ADE1失活,则细胞将会积聚赤色色素,显现赤色菌落。

【要领】

  1. 质粒构建
  2. sgRNA活性检测
  3. 选择活性较下的sgRNA停止基因组定点编纂
  4. 应用基因功用转变、表性转变和测序等要领检测基因定点润饰效果。

【结论】

  1. 从色彩表型转变得知,酵母菌落酿成赤色菌落,可知ADE1胜利敲除(图1);
  2. 阳性克隆菌落

  3. 测序效果显现,转化子的ADE1基因缺失了21个碱基,被胜利编纂(图2)。
  4. 测序效果

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