基因组挑选要领检测小鼠体内肿瘤细胞的发展和转移状况

【配景】

运用CRISPR-Cas9文库能够对小鼠体内的齐基因组停止挑选,形成基因组功用缺失的突变,以展现可以或许调治肺癌细胞增殖和转移的基因。经由过程此要领正在癌症小鼠体内挑选出的基因取人类肺癌细胞的转移和发展也有肯定的相关性。应用CRISPR-Cas9齐基因组文库挑选要领可普遍用于肿瘤细胞的发展和侵袭历程的研讨,关于掌握癌症细胞发展和抑止癌症侵袭具有肯定的研讨意义,也为癌症医治药物的靶点挑选供应了新方法。

【要领】

  1. 构建了Cas9-EGFP细胞系并构建一个包含67,405个sgRNA的齐基因组敲除文库,运用缓病毒转染Cas9-EGFP稳固细胞系后获得突变的细胞文库,将经由sgRNA突变的细胞文库打针到小鼠体内,视察癌细胞转移状况(图1);
  2. 凭据荧光卵白位置视察癌细胞转移状况,挑选获得突变细胞,对其基因组NGS测序后获得可以或许明显增进癌症转移的基因,并构建一个包含624个sgRNA的基因组文库对这些基因停止突变。
  3. 齐基因组文库挑选流程

【结论】

  1. 应用CRISPR-Cas9文库对小鼠体内齐基因组挑选后,发明NF2、PTEN、CDKN2A、TRIM72、FGA、miR-345及miR-152基因可以或许增进非小细胞肺癌细胞侵袭,且这些基因取原发性肿瘤的发展和侵袭成正相干;
  2. CRISPR-Cas9齐基因组挑选能够作为一个有用的要领去体系、周全的剖析体内癌症演化历程中基因的一些表现型。

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参考文献

  1. Chen, S., et al., Genome-wide CRISPR screen in a mouse model of tumor growth and metastasis. Cell, 2015. 160(6): p. 1246-60.